Alterungstherapie des Moscow Buyers Club - Forschungsplan

AIDS-Aktivisten in den 1980er Jahren

Basierend auf den Ergebnissen meines vorherigen Beitrags warfen mir einige Leser vor, keinen Plan darin zu beschreiben, sondern nur eine Hypothese. Obwohl es beides gab. Nur ein Plan war im Allgemeinen eine Vogelperspektive. Die Hypothese ist jedoch sehr einfach: Epigenetischer Rollback ist epigenetische Verjüngung . Indem wir das Genmethylierungsprofil in irgendeiner Weise zurücksetzen, rollen wir auch das biologische Alter des Körpers zurück, was bedeutet, dass wir es verjüngen.

Wenn sich jemand für den detaillierten Plan meiner Forschung interessiert, werde ich ihn unten skizzieren. Aber zuerst möchte ich einen weiteren Einwand beantworten, den ich gehört habe: "Ist es nicht einfacher, auf Belmonte zu warten?" Es ist natürlich einfacher. Es ist wirklich einfacher, zu sitzen und darauf zu warten, dass andere alle Ihre Probleme lösen. Aber wenn es um eine tödliche Krankheit geht, ist dies keine gute Strategie.

Wenn HIV-infizierte Menschen in den 80er Jahren still saßen und warteten, hätte ein viel geringerer Prozentsatz von ihnen lebensrettende antiretrovirale Erschütterungen überlebt. Sie verstanden dies sehr gut und organisierten deshalb Tausende von Demonstrationen , um so schnell wie möglich ein Heilmittel für HIV zu finden, und gründeten " Dalas Buyers ' Clubs ", um verschiedene experimentelle Therapien an sich selbst auszuprobieren.

Ich glaube, dass HIV 2.0 genauso behandelt werden sollte. Alles zu tun, um zumindest eine mehr oder weniger wirksame Therapie schnell zu entwickeln. Denn sonst werden unsere Eltern einer solchen Therapie nicht gerecht.
Und ich bin mir nicht sicher, ob Belmonte von dieser Idee genauso besessen ist wie ich. Aber auch wenn er aktiv in diesem Bereich forscht, ist es nichts Falsches, wenn mehrere Teams dies tun. In jedem Fall ist Belmonte in erster Linie ein Wissenschaftler. Und ich bin ein Praktizierender. Nur das Endergebnis in Form einer lebensverlängernden Therapie ist mir wichtig, und selbst der kommerzielle Wert ist für mich zweitrangig. Wenn alles klappt, bin ich mir sicher, dass auch der kommerzielle Erfolg kommen wird. Geld ist jedoch kein Selbstzweck, sondern nur ein Instrument, um ein viel wichtigeres Ziel zu erreichen.

Eigentlich der Forschungsplan

Zuerst unterrichtet eine kleine Mutter. Die Schlüsselhypothese: Um den gesamten Körper zuverlässig zu verjüngen, müssen wir die epigenetische Uhr der meisten Körperzellen, wenn nicht aller Zellen, zurücksetzen. Dank der Arbeit der Belmonte-Gruppe wissen wir, dass dies möglich ist, indem OSKM-Faktoren (oder andere Transkriptionsfaktoren) in die Zelle abgegeben werden. Darüber hinaus unterliegt der Prozess dem „Goldlöckchen-Problem“: Der Rollback ist zu schwach, wir werden keinen signifikanten Anti-Aging-Effekt erzielen. Wenn Sie zu viel zurückrollen, können Sie an Krebs erkranken, da die Zellen ihren Phänotyp verlieren und in den pluripotenten Stammzustand zurückkehren.

Vergessen Sie nicht, dass es die Fähigkeit war, Zellen effektiv in den pluripotenten Zustand zurückzubringen, die als Hauptauswahlkriterium für Yamanaka diente, 4 OSKM-Faktoren aus den ersten 24 Kandidaten auszuwählen. Obwohl OSKM-Faktoren ihre Wirksamkeit zur Verjüngung durch teilweises Zurückrollen gezeigt haben und eine "Meise in der Hand" sind, sind sie daher für den Zweck einer sicheren Verjüngung alles andere als ideal. Es lohnt sich also, weiterhin nach sichereren Wegen zum epigenetischen Rollback zu suchen. Es ist sinnvoll, zunächst die verbleibenden 20 Faktoren der ursprünglichen 24 Yamanaki-Faktoren zu überprüfen und auch zu versuchen, den Oct4-Faktor allein zu verwenden, da es Hinweise darauf gibt, dass er allein die Epigenetik zurücksetzen kann und im Allgemeinen der Haupt- "Hüter des epigenetischen Tors" ist.

Es lohnt sich auch, andere in den letzten Jahren entwickelte Umprogrammierungsmethoden zu prüfen. Schauen Sie sich zum Beispiel die Methode an, die Transkriptionsfaktoren Oct4, Sox2, c-Myc durch Antikörper zu ersetzen, die diese Woche buchstäblich veröffentlicht wurde . Wenn dieser Ansatz funktioniert, sind genetische Manipulationen möglicherweise überhaupt nicht erforderlich, und die regelmäßige Verabreichung von Antikörpern reicht aus. Obwohl bei wiederholter Verabreichung Probleme mit einer sekundären Immunantwort auftreten können.

In jedem Fall ist für mich die Haupthypothese der Therapie die Gentherapie mit Hilfe bestimmter Pullback-Faktoren. Aber die besten Faktoren zu finden ist nur die halbe Miete. Die andere Hälfte ist, wie man sie sicher und im Idealfall billig liefert. Das epigenetische Alterungsprogramm ist selbst angesichts wöchentlicher Rückschläge ziemlich hartnäckig, wie die Arbeit der Belmonte-Gruppe gezeigt hat. Um eine signifikante Verjüngung bei Menschen zu erreichen, müssen Sie daher höchstwahrscheinlich die Rollback-Faktoren monatlich oder sogar wöchentlich aktivieren.

Der wirtschaftlichste Weg, dies zu tun, scheint mir die Integration einer speziellen, standardmäßig inaktiven Genkassette (die die Pullback-Faktor-Gene enthält) in fast jede Zelle des Patienten zu integrieren, vermutlich unter Verwendung von Lentiviren oder einer anderen integrativen Abgabemethode. Ferner muss eine solche Kassette periodisch durch ein einzigartiges und inertes Mittel aktiviert werden, das separat entwickelt werden kann und eine solche Therapie patentierbar macht. Solche Kassetten werden heute beispielsweise mit Tetracyclin oder Doxycyclin aktiviert. Bei diesem Ansatz werden die Kosten für die wöchentliche Induktion von Anti-Aging-Faktoren nur durch die Kosten des Induktionsmittels (vermutlich eines kleinen Moleküls oder Peptids) bestimmt - das heißt, es ist relativ billig.

Der optimale Plan, den ich sehe, ist eine schrittweise, iterative Verbesserung des bereits bewährten Ansatzes (Induktion von OSKM-Faktoren unter Verwendung von Doxycyclin; eine solche Kassette mit OSKM-Faktoren kann mit einem heute auf dem Markt erhältlichen lentiviralen Träger an den Körper abgegeben werden) und die parallele Entwicklung einer idealen Therapie (die sichersten und effektivsten Faktoren) aktiviert durch ein einzigartiges, inertes, patentierbares Mittel).

Somit kann die Forschung in drei parallele Spuren unterteilt werden:

• Entwickeln Sie ein optimales Dosierungsschema unter Verwendung von 4 OSKM-Quellenfaktoren
• Finden Sie sicherere Faktoren (die nicht zu einer vollständigen De-Differenzierung führen) oder Methoden des epigenetischen Rollbacks
• das beste Mittel zur Genabgabe schaffen (vorzugsweise patentierbar)

Als nächstes werde ich alle drei Forschungsbereiche genauer beschreiben.

Forschungsspur 1 (Meise in der Hand): Entwickeln Sie ein optimales Dosierungsschema unter Verwendung von 4 OSKM-Quellenfaktoren

Die Belmonte-Gruppe stellte fest, dass Mäuse nach 3 aufeinanderfolgenden Tagen der OSKM-Induktion zu sterben beginnen:


Daher verwendeten sie das 2/5-Protokoll, bei dem Mäuse (mit nur der ersten Kopie des Allels mit der OSKM-Kassette - dies ist wichtig, da bei Mäusen mit 2 Kopien gebildete Teratome) 2 Tage hintereinander einer OSKM-Induktion unterzogen wurden (unter Verwendung von Doxycyclin). und erhielt dann eine 5-tägige Pause, bevor der Behandlungszyklus wiederholt wurde.

Das Gewicht der Mäuse begann jedoch bereits ab dem 2. Tag der Induktion abzunehmen:


Dies legt nahe, dass eine zweitägige sequentielle Induktion nicht optimal ist. Darüber hinaus scheint mir die 5-tägige Pause zu lang zu sein, basierend auf dem, was ich über Zellzyklen weiß. Ich denke, das 1/2 oder 1/3 Behandlungsschema hat das beste Langzeitpotential (1-tägige Induktion und 2- oder 3-tägige Pause).

Um diese Annahmen zu überprüfen, sind die folgenden Schritte erforderlich (diese Studien werden am besten von großen CROs wie Charles River bestellt):

• Kaufen Sie Wildtyp-Mäuse mit der OSKM-Genkassette bei Jackson Laboratories, vorzugsweise im Alter von 12 Monaten.
• Ideal wären 30 Kontrollmäuse + 20 Gruppen von jeweils 12 Mäusen für unterschiedliche Dosen / Regime
• Führen Sie alle Gruppen parallel aus
• Nehmen Sie regelmäßig Blut, Speichel und Urin von einigen Mäusen aus jeder Gruppe, um Änderungen im Methylierungsprofil zu überwachen, insbesondere vor und nach der Induktion von OSKM-Faktoren, um sicherzustellen, dass tatsächlich eine epigenetische Verjüngung auftritt
• Einige Gruppen werden kognitiven und physikalischen Tests unterzogen, um die Hypothese zu testen, dass die Mäuse in den Behandlungsgruppen ein niedrigeres biologisches Alter haben, und um das beste Dosierungsschema festzulegen, ohne auf die vollständige Mortalität in allen Gruppen zu warten (da die Kontrollmäuse allein 2,5 Jahre leben und Wenn die Therapie erfolgreich ist, kann dieser Indikator für Versuchsgruppen signifikant ansteigen.
• Bringen Sie für ein GVO-Projekt für Haustiere mehrere transgene Hunde- und Katzenrassen mit der OSKM-Kassette heraus und testen Sie verschiedene Induktionsmodi dieser Gene, wobei Sie dieselben Daten wie bei Mäusen sammeln

Forschungsspur 2 („Cranes in the Sky“): Suche nach sichereren epigenetischen Pullback-Faktoren (die nicht zu einer vollständigen De-Differenzierung führen)

• Beginnen Sie mit Untersuchungen nur des Oct4-Faktors in vitro durch Messung epigenetischer Veränderungen (unter Verwendung der Hannum / Horvath-Methylierungsuhr) - da es Hinweise darauf gibt, dass nur dieser Transkriptionsfaktor für die epigenetische Verjüngung ausreicht
• Untersuchen Sie im Idealfall jeden der 24 anfänglichen Yamanaki-Faktoren in vitro, indem Sie epigenetische Veränderungen messen (unter Verwendung derselben Hannum / Horvath-Methylierungsuhr).
• Untersuchen Sie dann jede Kombination identifizierter Faktoren an schnell alternden LAKI-Mäusen, indem Sie für jede Kombination unter Verwendung einer Doxycyclin-Kassette einen neuen transgenen Stamm erstellen
• Untersuchen Sie die Sicherheit dieser Faktoren durch konsequente tägliche Aktivierung (wie bei Belmontes Arbeit mit OSKM). Das Ziel ist es, ein besseres Überleben zu finden, als die OSKM-Faktoren zeigten (an denen die Mäuse nach 3 aufeinanderfolgenden Induktionstagen zu sterben begannen).
• Um die sichersten Faktoren zu gewährleisten, testen Sie neue Dosierungsschemata an LAKI-Mäusen, um deren Lebensdauer um mehr als 50% zu verlängern
• Paralleles Projekt: Verwenden Sie wie in dieser Arbeit Antikörper anstelle der Faktoren Oct4, Sox2, c-Myc. Wenn dieser Ansatz funktioniert, ist eine Genmanipulation überhaupt nicht erforderlich . Genug wird die Einführung von Antikörpern sein. Beginnen Sie mit LAKI-Mäusen und überprüfen Sie WT-Mäuse mit einem Auge auf Veränderungen der Methylierungsstunden (wird die Bioalterung nicht schlechter abnehmen als bei OSKM?)
• Paralleles Projekt: Untersuchung der Rolle von Piwi und Piwi-interagierenden RNAs als Transposonsuppressoren und mögliche epigenetische Verjüngung, wie in diesem Artikel .
• Paralleles Projekt: Untersuchung der Histonvarianten TH2A und TH2B, die laut dieser Arbeit Sox2 und c-Myc ersetzen können, was bedeutet, dass sie selbst einen epigenetischen Rückschlag auslösen können.

Forschungsspur 3: Lieferfahrzeug (Träger) und Patentierbarkeit

• AAB- und OSKM-Kassetten-Lentiviren können ab sofort erworben werden. Es ist notwendig, erwachsene LAKI- und WT-Mäuse zu nehmen und eine Reihe von Experimenten durchzuführen, um (a) die Effizienz der Abgabe dieser Gene an einen erwachsenen Organismus und (b) die Auswirkung ihrer Induktion auf die Methylierungsstunden und die biologischen Parameter zu untersuchen. Werden solche Mäuse länger leben, selbst wenn die OSKM-Gene weit von allen Zellen entfernt sind? Solche Studien müssen ebenfalls bestellt werden.
• Bei integrativen Ansätzen (dh bei der Integration neuer Gene in die DNA) ist das Haupthindernis bei erwachsenen Tieren der geringe Integrationsgrad (10–50% für AAV- oder lentivirale Vektoren) sowie die geringe Permeabilität der Blut-Hirn-Schranke (und wir sind höchstwahrscheinlich kritisch) Es ist wichtig, den Hypothalamus zu verjüngen. Daher sollte dies einer der Hauptforschungsbereiche sein. Es ist notwendig, die sequentielle Mehrfachtransfektion zu testen - ist es auf diese Weise möglich, die Abgabe der erforderlichen Gene in mindestens 75% der Zellen in allen Geweben zu erreichen? Wir brauchen einen Algorithmus zum Schutz vor wiederholter Induktion in derselben Zelle - wenn mehrere Kassetten mit Genen in die Zelle gelangen, wollen wir nicht, dass sie alle induziert werden.
• Andere Abgabemethoden: Abgabe von Proteinen oder mRNA (nicht integrativ, aber teuer). Auftragsforschung von Unternehmen, die an der Entwicklung von Methoden zur Genabgabe beteiligt sind. Zum Beispiel Scarab Genomics .
• Eine andere Methode: Antikörper-freigesetzte DNA-Freisetzung (neue, experimentelle, teure Methode). Es wird notwendig sein, sich mit den Entwicklern zu beraten.
• Um die Chancen des Interesses an Big Pharma mit dieser Therapie zu maximieren - ohne die es unmöglich wäre, klinische Studien im Wert von Hunderten von Millionen Dollar durchzuführen -, müssen Sie nicht nur einen sicheren und wirksamen, sondern auch einen patentierbaren Ansatz anstreben: Idealerweise sollte es sich um eine Kassette mit einer einzigartigen Kombination von Faktoren handeln. aktiviert durch einen sicheren, inerten und patentierten Aktivator (im Gegensatz zu Doxycyclin). Die Patrone selbst (Schale + Induktor) kann sowohl selbst entwickelt als auch gekauft (lizenziert) werden, sobald solche Liefersysteme verfügbar sind.

Preise, Termine

Folgendes habe ich zu Preisen und Konditionen erhalten:

• Research Track 1 (OSKM-Faktoren bei Mäusen): 1,5–2 Mio. USD; Laufzeit: 3 Jahre
• Forschungsspur 1 (Haustiere): 3-4 Millionen US-Dollar; Laufzeit: 2 Jahre
• Forschungsspur 2 (beste Faktoren): 6–8 Millionen US-Dollar; Laufzeit: 4–5 Jahre
• Research Track 3 (Lieferfahrzeug): 2–3 Mio. USD; Laufzeit: 2-3 Jahre
• Sicherheit: 3-5 Millionen US-Dollar; Laufzeit: 2-3 Jahre
• Studie über Primaten (optional): 2–2,5 Millionen US-Dollar; Laufzeit: 1-2 Jahre
• Gehälter / Gemeinkosten / Patent / Recht und Sonstiges: 1,5 bis 2 Millionen US-Dollar pro Jahr

Wichtige Projektmeilensteine:

• 2 Jahre vor dem Start von GVO-Haustieren mit Doxycyclin-induzierten OSKM-Genen
• 3-4 Jahre vor der Mindesttherapie für erwachsene Haustiere (Lentivirus mit OSKM oder anderen Faktoren)
• 5–6 Jahre vor Beginn der Studien zur Minimaltherapie beim Menschen (Stadium der Einreichung eines IND-Antrags bei der FDA)

Eine Projektlaufzeit von 5 bis 6 Jahren bedeutet Gemeinkosten in Höhe von 7,5 bis 12 Millionen US-Dollar, basierend auf den oben genannten 1,5 bis 2 Millionen US-Dollar pro Jahr. Der Gesamtbetrag der Ausgaben vor der IND-Phase beträgt somit 24 bis 37,5 Millionen US-Dollar.

Wenn das Projekt das IND-Stadium erfolgreich erreicht, werden Big Pharma-Unternehmen es mit Armen und Beinen abreißen, die dann klinische Studien mit einer solchen Therapie beginnen (zunächst bei Arteriosklerose, Alzheimer-Krankheit, Diabetes oder anderen altersabhängigen Nosologien, für die es heute notwendig ist, Medikamente zu testen, um das Altern zu verlangsamen da das Altern selbst von der WHO noch nicht als Krankheit eingestuft wurde).

Zusammenfassung

Ein solches Projekt des Moskauer Club der Käufer kristallisierte sich in meinem Kopf heraus. Oder sogar ein "Club der Selbstretter". Mal sehen, was passiert. Wenn Sie eine Finanzierung für ihn finden können, denke ich, dass es eine herrliche Jagd sein wird. Ich hoffe, dass HIV 2.0 nach seinen Ergebnissen erhebliche Verluste erleiden wird und wir in der Lage sein werden, mindestens einige Jahrzehnte eines gesunden Lebens für uns und unsere Angehörigen zurückzugewinnen.