Moscou Buyers Club thérapie de vieillissement - plan de recherche

Militants du sida dans les années 80

Sur la base des résultats de mon post précédent, certains lecteurs m'ont reproché de ne pas y décrire un plan, mais seulement une hypothèse. Bien qu'il y ait les deux. Juste un plan était en termes généraux, une vue plongeante. Mais l'hypothèse est très simple: le recul épigénétique est un rajeunissement épigénétique . Par conséquent, en faisant reculer le profil de méthylation des gènes de quelque manière que ce soit , nous faisons également reculer l'âge biologique du corps, ce qui signifie que nous le rajeunissons.

Si quelqu'un est intéressé par le plan détaillé de mes recherches, je le décrirai ci-dessous. Mais je veux d'abord répondre à une autre objection que j'ai entendue: "N'est-il pas plus facile d'attendre Belmonte?" C'est, bien sûr, plus simple. Il est vraiment plus facile de s'asseoir et d'attendre que d'autres résolvent tous vos problèmes. Mais quand il s'agit d'une maladie mortelle, ce n'est pas une bonne stratégie.

Si les personnes infectées par le VIH dans les années 80 étaient restées silencieuses et avaient attendu, je pense qu'un pourcentage beaucoup plus faible d'entre elles aurait survécu à des secousses antirétrovirales vitales. Ils l'ont très bien compris et ont donc organisé des milliers de manifestations , demandant de trouver un remède contre le VIH dans les plus brefs délais, et ont également créé des « Dalas Buyers ' Clubs » afin d'essayer eux-mêmes diverses thérapies expérimentales.

Je pense que le VIH 2.0 devrait être traité de la même manière. Faire tout son possible pour le développement rapide d'au moins une thérapie plus ou moins efficace. Sinon, nos parents ne seront pas à la hauteur d'une telle thérapie.
Et je ne suis pas sûr que Belmonte soit aussi obsédé par cette idée que moi. Mais même s'il poursuit activement ses recherches dans ce domaine, il n'y a rien de mal à ce que plusieurs équipes le fassent. En tout cas, Belmonte est avant tout un scientifique. Et je suis un pratiquant. Seul le résultat final sous la forme d'un traitement prolongeant la vie est important pour moi, et même sa valeur commerciale est secondaire pour moi. Bien que si tout fonctionne, je suis sûr que le succès commercial viendra aussi. Mais l'argent n'est pas une fin en soi, c'est seulement un outil pour atteindre un objectif beaucoup plus important.

En fait, le plan de recherche

Tout d'abord, une petite mère qui enseigne. Donc, l'hypothèse clé: afin de rajeunir de manière fiable le corps entier, nous devons faire reculer l'horloge épigénétique de la plupart des cellules du corps, sinon de toutes les cellules du tout. Grâce au travail du groupe Belmonte, nous savons que cela est possible en apportant des facteurs OSKM (ou d'autres facteurs de transcription) dans la cellule. De plus, le procédé est soumis au «problème Boucle d'or»: le retour en arrière est trop faible, nous n'obtiendrons pas un effet anti-âge significatif; trop de recul, vous pouvez avoir un cancer, car les cellules perdront leur phénotype et retourneront à l'état pluripotent de la tige.

N'oubliez pas que c'est la capacité de remettre efficacement les cellules dans l'état pluripotent qui a servi de critère de sélection principal pour Yamanaka pour choisir 4 facteurs OSKM parmi les 24 candidats initiaux. Par conséquent, bien que les facteurs OSKM aient montré leur efficacité pour le rajeunissement par retour en arrière partiel et soient une «mésange dans la main», ils sont loin d'être idéaux dans le but d'un rajeunissement sûr. Il vaut donc la peine de continuer à rechercher des moyens plus sûrs de restauration épigénétique. Il est logique de commencer par vérifier les 20 facteurs restants des 24 facteurs Yamanaki d'origine , et d'essayer également d'utiliser le facteur Oct4 seul, car il est prouvé que lui seul est capable de faire reculer l'épigénétique et en général est le principal `` gardien de la porte épigénétique ''.

Il convient également de vérifier d'autres méthodes de reprogrammation développées ces dernières années. Par exemple, regardez la méthode de remplacement des facteurs de transcription Oct4, Sox2, c-Myc par des anticorps, qui a été publiée littéralement cette semaine . Si cette approche fonctionne, alors les manipulations génétiques peuvent ne pas être nécessaires du tout, et l'administration périodique d'anticorps suffira. Bien qu'avec une administration répétée, des problèmes de réponse immunitaire secondaire peuvent survenir.

En tout cas, jusqu'à présent, l'hypothèse principale de la thérapie est la thérapie génique, à l'aide de certains facteurs de recul. Mais trouver les meilleurs facteurs ne représente que la moitié de la bataille. L'autre moitié est de savoir comment les livrer en toute sécurité et, idéalement, à moindre coût. Le programme de vieillissement épigénétique est assez têtu malgré les pots-de-vin hebdomadaires, comme l'ont montré les travaux du groupe Belmonte. Par conséquent, afin d'atteindre un rajeunissement significatif chez les personnes, vous devrez probablement activer les facteurs de restauration sur une base mensuelle, voire hebdomadaire.

La façon la plus économique de le faire me semble intégrer une cassette de gène inactive spéciale (contenant les gènes du facteur de retrait) dans presque toutes les cellules du patient, vraisemblablement en utilisant des lentivirus ou une autre méthode d'administration intégrative. En outre, une telle cassette devra être périodiquement activée par un agent unique et inerte qui peut être développé séparément et rendra une telle thérapie brevetable. Aujourd'hui, de telles cassettes sont activées, par exemple, avec de la tétracycline ou de la doxycycline . Avec cette approche, le coût de l'induction hebdomadaire des facteurs anti-âge ne sera déterminé que par le coût de l'agent d'induction (vraisemblablement une petite molécule ou un peptide) - c'est-à-dire qu'il sera relativement bon marché.

Le plan optimal que je vois est une amélioration progressive et itérative de l'approche déjà éprouvée (induction de facteurs OSKM à l'aide de doxycycline; une telle cassette avec des facteurs OSKM peut être livrée à l'organisme à l'aide d'un support lentiviral disponible sur le marché aujourd'hui) et le développement parallèle d'une thérapie idéale (les facteurs les plus sûrs et les plus efficaces activé par un agent unique, inerte et brevetable).

Ainsi, la recherche peut être divisée en trois pistes parallèles:

• développer un schéma posologique optimal en utilisant 4 facteurs sources OSKM
• trouver des facteurs ou des méthodes de recul épigénétique plus sûrs (ne conduisant pas à une dé-différenciation complète)
• créer le meilleur moyen de livraison de gènes (de préférence brevetable)

Ensuite, je décrirai plus en détail les trois domaines de recherche.

Piste de recherche 1 (mésange dans la main): développer un schéma posologique optimal en utilisant 4 facteurs sources OSKM

Le groupe Belmonte a constaté que les souris commencent à mourir après 3 jours consécutifs d'induction OSKM:


Par conséquent, ils ont utilisé le protocole 2/5, dans lequel les souris (avec seulement la première copie de l'allèle avec la cassette OSKM - ceci est important parce que les tératomes formés chez les souris avec 2 copies) ont été soumis à une induction OSKM pendant 2 jours consécutifs (en utilisant de la doxycycline), puis a reçu une pause de 5 jours avant de répéter le cycle de traitement.

Cependant, le poids des souris a commencé à diminuer dès le 2ème jour d'induction:


Cela suggère que l'induction séquentielle de deux jours n'est pas optimale. De plus, la pause de 5 jours me semble trop longue, d'après ce que je sais des cycles cellulaires. Je pense que le schéma thérapeutique 1/2 ou 1/3 a le meilleur potentiel à long terme (induction sur 1 jour et pause de 2 ou 3 jours).

Pour vérifier ces hypothèses, les étapes suivantes sont nécessaires (ces études sont mieux commandées auprès de grands CRO, tels que Charles River):

• Achetez des souris de type sauvage avec la cassette du gène OSKM chez Jackson Laboratories, de préférence à 12 mois.
• L'idéal serait de 30 souris témoins + 20 groupes de 12 souris chacun pour différentes doses / régimes
• Exécuter tous les groupes en parallèle
• Prenez régulièrement du sang, de la salive et de l'urine de certaines souris de chaque groupe pour surveiller les changements dans le profil de méthylation, en particulier avant et après l'induction des facteurs OSKM - pour vous assurer que le rajeunissement épigénétique se produit réellement
• Certains groupes subissent des tests cognitifs et physiques pour tester l'hypothèse que les souris dans les groupes de traitement ont un âge biologique inférieur et pour établir le meilleur schéma posologique sans attendre la mortalité complète dans tous les groupes (puisque les souris témoins seules vivent 2,5 ans, et si la thérapie réussit, cet indicateur peut augmenter de manière significative pour les groupes expérimentaux)
• Pour un projet OGM pour animaux de compagnie, faites ressortir plusieurs races transgéniques de chiens et de chats avec la cassette OSKM et testez différents modes d'induction de ces gènes, en collectant les mêmes données que sur les souris

Piste de recherche 2 («Cranes in the Sky»): recherche de facteurs de retrait épigénétiques plus sûrs (ne conduisant pas à une dé-différenciation complète)

• Commencez par des études uniquement du facteur Oct4 in vitro en mesurant les changements épigénétiques (en utilisant l'horloge de méthylation de Hannum / Horvath) - car il est prouvé que seul ce facteur de transcription est suffisant pour le rajeunissement épigénétique
• Idéalement, examinez chacun des 24 facteurs Yamanaki initiaux in vitro en mesurant les changements épigénétiques (en utilisant la même horloge de méthylation Hannum / Horvath)
• Ensuite, examinez chaque combinaison de facteurs identifiés sur des souris LAKI vieillissant rapidement en créant une nouvelle souche transgénique pour chaque combinaison à l'aide d'une cassette de doxycycline
• Examiner la sécurité de ces facteurs en utilisant une activation quotidienne cohérente (comme dans le travail de Belmonte avec OSKM). L'objectif est de trouver une meilleure survie que les facteurs OSKM (à partir desquels les souris ont commencé à mourir après 3 jours consécutifs d'induction)
• De plus, pour les facteurs les plus sûrs, testez de nouveaux schémas posologiques sur des souris LAKI afin de prolonger leur durée de vie de plus de 50%
• Projet parallèle: utiliser des anticorps au lieu des facteurs Oct4, Sox2, c-Myc comme dans ce travail . Si cette approche fonctionne, la manipulation des gènes ne sera pas du tout nécessaire . Assez sera l'introduction d'anticorps. Commencez avec les souris LAKI, vérifiez les souris WT avec un œil pour les changements d'heures de méthylation (le bio-vieillissement ne diminuera-t-il pas pire que celui de l'OSKM?)
• Projet parallèle: étudier le rôle des Piwi et des ARN interagissant avec Piwi en tant que suppresseurs de transposons et rajeunissement épigénétique potentiel, comme dans cet article .
• Projet parallèle: étudier les variantes des histones TH2A et TH2B, qui, selon ce travail , peuvent remplacer Sox2 et c-Myc, ce qui signifie qu'elles peuvent elles-mêmes induire un rebond épigénétique.

Volet de recherche 3: Véhicule de livraison (transporteur) et brevetabilité

• Les lentivirus cassettes AAB et OSKM peuvent être achetés maintenant. Il est nécessaire de prendre des souris adultes LAKI et WT et de mener une série d'expériences sur (a) l'efficacité de la livraison de ces gènes à un organisme adulte, et (b) l'effet sur les heures de méthylation et les paramètres biologiques de leur induction. Ces souris vivront-elles plus longtemps, même si les gènes OSKM s'éloignent de toutes les cellules? De telles études devront également être commandées.
• Pour les approches intégratives (c'est-à-dire avec l'intégration de nouveaux gènes dans l'ADN), le principal obstacle à l'utilisation chez les animaux adultes est le faible degré d'intégration (10 à 50% pour les AAV ou les vecteurs lentiviraux), ainsi que la faible perméabilité de la barrière hémato-encéphalique (et nous sommes très probablement critiques il est important de rajeunir l'hypothalamus). Par conséquent, cela devrait être l'un des principaux domaines de recherche. Il est nécessaire de tester la transfection multiple séquentielle - est-il possible de cette manière d'obtenir l'apport des gènes nécessaires dans au moins 75% des cellules dans tous les tissus? Nous avons besoin d'un algorithme de protection contre l'induction répétée dans la même cellule - si plusieurs cassettes avec des gènes y pénètrent, nous ne voulons pas qu'elles soient toutes induites.
• Autres modes d'administration: administration de protéines ou d'ARNm (non intégrative, mais coûteuse). Commandez des recherches auprès d'entreprises impliquées dans le développement de méthodes de livraison de gènes. Par exemple, Scarab Genomics .
• Autre méthode: libération d'ADN libéré par anticorps (nouvelle méthode expérimentale et coûteuse). Il sera nécessaire de consulter ses développeurs.
• Pour maximiser les chances d'intérêt pour Big Pharma avec cette thérapie - sans laquelle il serait impossible de mener des essais cliniques valant des centaines de millions de dollars - vous devez vous efforcer non seulement pour une approche sûre et efficace, mais aussi pour une approche brevetable: idéalement, ce devrait être une cassette avec une combinaison unique de facteurs, activé par un activateur sûr, inerte et breveté (contrairement à la doxycycline). La cartouche elle-même (coque + inductance) peut être développée seule et achetée (sous licence) dès que de tels systèmes de distribution sont disponibles.

Prix, dates

Voici ce que j'ai obtenu aux prix et conditions:

• Piste de recherche 1 (facteurs OSKM chez la souris): 1,5 à 2 millions de dollars; durée: 3 ans
• Piste de recherche 1 (animaux de compagnie): 3 à 4 millions de dollars; durée: 2 ans
• Piste de recherche 2 (meilleurs facteurs): 6 à 8 millions de dollars américains; durée: 4 à 5 ans
• Volet de recherche 3 (véhicule de livraison): 2 à 3 millions de dollars; durée: 2-3 ans
• Sécurité: 3-5 millions de dollars américains; durée: 2-3 ans
• Étude sur les primates (facultatif): 2 à 2,5 millions de dollars américains; durée: 1-2 ans
• Salaires / frais généraux / brevets / services juridiques et autres: 1,5 à 2 millions de dollars par an

Jalons clés du projet:

• 2 ans avant le lancement d'animaux domestiques OGM avec des gènes OSKM induits par la doxycycline
• 3-4 ans avant la thérapie minimale pour les animaux de compagnie adultes (lentivirus avec OSKM ou autres facteurs)
• 5 à 6 ans avant le début des essais de thérapie minimale chez l'homme (étape de dépôt d'une demande IND auprès de la FDA)

Une durée de projet de 5 à 6 ans signifie des frais généraux d'un montant de 7,5 à 12 millions de dollars, sur la base des 1,5 à 2 millions de dollars par an susmentionnés. Ainsi, le montant total des dépenses avant la phase IND est de: 24–37,5 millions de dollars américains.

Si le projet réussit à atteindre le stade IND, les sociétés Big Pharma l'arracheront avec les bras et les jambes, qui commenceront ensuite les essais cliniques de cette thérapie (d'abord de l'athérosclérose, de la maladie d'Alzheimer, du diabète ou d'autres nosologies liées à l'âge, pour lesquelles il est aujourd'hui nécessaire de tester des médicaments pour ralentir le vieillissement, donc comme le vieillissement lui-même n'a pas encore été classé par l'OMS comme une maladie).

Résumé

Un tel projet du Club des acheteurs de Moscou s'est cristallisé dans ma tête. Ou même un «club d'auto-sauveteurs». Voyons ce qui se passe. Si vous pouvez trouver du financement pour lui, je pense que ce sera une chasse glorieuse. J'espère que d'après ses résultats, le VIH 2.0 subira des pertes importantes et nous pourrons regagner au moins plusieurs décennies d'une vie saine pour nous et nos proches.