1980年代的艾滋病活动家根据我
以前的文章的结果
，一些读者责备我不要描述其中的计划，而只是描述一个假设。 虽然两者都有。 总体而言，只是一个计划，只是鸟瞰图。 但是这个假设很简单：
表观遗传回滚就是表观遗传复兴 。 因此，通过以
任何方式回滚基因甲基化分布图，我们还回滚了人体的生物年龄，这意味着我们使其焕发青春。
如果有人对我的详细研究计划感兴趣，我将在下面概述。 但是首先，我想回答我听到的另一个异议：“等贝尔蒙特，难道不是很容易吗？” 当然，这更简单。 坐下来等待别人解决您所有的问题真的很容易。 但是当涉及致命疾病时，这不是一个好的策略。
如果80年代感染了HIV的人们静静地坐着等待，我认为其中只有极少数的人能够幸免于命，从而挽救生命。 他们非常了解这一点，因此组织了
数千次示威游行 ，要求尽快找到治疗艾滋病的方法，并创建了“
达拉斯购买者
俱乐部 ”，以对自己进行各种实验性疗法。
我认为应该以同样的方式对待
HIV 2.0 。 尽一切可能迅速发展至少某种或多或少有效的疗法。 因为否则我们的父母将不辜负这种疗法。
而且我不确定Belmonte是否会像我一样迷恋这个想法。 但是，即使他也积极地继续在这一领域进行研究，但拥有多个团队这样做也没有错。 无论如何，贝尔蒙特（Belmonte）主要是科学家。 我是从业者。 只有延长寿命的治疗形式的最终结果对我来说很重要，甚至其商业价值对我来说也是次要的。 尽管一切顺利，但我相信商业上的成功也将会实现。 但是金钱本身并不是目的，它只是实现更重要目标的工具。
实际上，研究计划
首先，小妈妈教书。 因此，关键的假设是：为了可靠地使整个身体恢复活力，我们需要回滚大多数细胞的表观遗传时钟，即使不是
每个细胞。 感谢Belmonte小组的工作，我们知道可以通过将OSKM因子（或其他转录因子）传递到细胞中来实现。 此外，该过程还受制于“ Goldilocks问题”：回滚太弱，我们将不会获得明显的抗衰老效果； 回滚过多，您可能会得癌症，因为细胞将失去表型并返回到干的多能状态。
不要忘记，有效地使细胞返回多能状态的能力是Yamanaka从最初的24个候选物中选择4个OSKM因子的主要选择标准。 因此，尽管OSKM因素已显示出通过部分回滚进行复兴的有效性，并且“一针见血”，但对于安全复兴而言，它们远非理想。 因此，值得继续寻找更安全的表观遗传回滚方法。 首先检查
原始的24个Yamanaki因子中的剩余20
个因子 ，然后尝试单独使用Oct4因子是
有道理的 ，因为有证据表明，他一个人
就能还原表观遗传学，并且通常是“表观遗传门的主要守护者”。
还值得检查一下近年来开发的其他重新编程方法。 例如，看一下用抗体替换转录因子Oct4，Sox2，c-Myc的方法，该方法
本周已按字面意义发布 。 如果这种方法可行，那么
根本就不需要遗传操作，并且定期施用抗体就足够了。 尽管重复给药，继发免疫反应可能会出现问题。
无论如何，到目前为止，对我而言，治疗的主要假设是基因治疗，并借助某些拉回因素。 但是，找到最佳因素只是成功的一半。 另一半是如何安全地，理想地便宜地交付它们。 正如Belmonte小组的工作表明的那样，即使面对每周的回扣，表观遗传的衰老程序也非常顽固。 因此，为了使人们焕发青春，您很有可能必须每月或每周激活回滚因子。
最经济的方法是将特殊的默认无活性基因盒（包含拉回因子的基因）整合到患者的几乎所有细胞中，大概使用慢病毒或其他整合递送方法。 此外，这种盒将必须由独特的惰性试剂周期性地激活，所述惰性试剂可以单独开发，并使这种治疗可取得专利。 今天，这种盒
例如用四环素或强力霉素激活。 通过这种方法，每周诱导抗衰老因子的成本将仅由诱导剂（大概是小分子或肽）的成本决定-也就是说，它将相对便宜。
我看到的最佳计划是逐步地，反复地改进已经证实的方法（使用强力霉素诱导OSKM因子；可以使用当今市场上出售的慢病毒载体将具有OSKM因子的这种暗盒运送到体内），并并行开发理想疗法（最安全，最有效的因子）由独特的，惰性的，可专利的代理激活）。
因此，研究可以分为三个平行的轨道：
- 利用4种OSKM来源因素制定最佳剂量方案
- 找到更安全（不会导致完全去分化）的因素或表观遗传回滚方法
- 创建最佳的基因传递方式（最好是获得专利）
接下来，我将更详细地描述这三个研究领域。
研究方向1（手中的山雀）：使用4种OSKM来源因素开发最佳剂量方案
Belmonte研究小组发现小鼠在连续三天OSKM诱导后开始死亡：
因此，他们使用了2/5协议，在该协议中，小鼠（只有带有OSKM盒的等位基因的第一个副本-这很重要，因为在具有2个副本的小鼠中形成的畸胎瘤）连续2天（使用强力霉素）进行OSKM诱导，然后休息5天，然后重复治疗周期。
但是，小鼠的体重从诱导的第二天开始就开始下降：
这表明两天的连续诱导不是最佳的。 而且，根据我对细胞周期的了解，对我而言，为期5天的休息时间似乎太长了。 我认为1/2或1/3治疗方案具有最佳的长期潜能（1天诱导，2天或3天休息）。
为了验证这些假设，必须执行以下步骤（最好从大型CRO（例如Charles River）订购这些研究）：
- 最好在Jackson实验室购买带有OSKM基因盒的野生型小鼠 ，最好在12个月大时。
- 理想的情况是30只对照小鼠+ 20组，每组12只小鼠，分别使用不同的剂量/方案
- 并行运行所有组
- 定期从每组的一些小鼠身上抽取血液，唾液和尿液，以监测甲基化曲线的变化，尤其是在诱导OSKM因子之前和之后-确保确实发生了表观遗传的年轻化
- 一些小组接受了认知和身体测试，以检验治疗组小鼠的生物学年龄较低的假设，并建立最佳的给药方案，而无需等待所有组中的完全死亡（因为对照组小鼠仅存活2.5年，而如果治疗成功，则该指标对于实验组可能会显着增加）
- 对于宠物的GMO项目，请使用OSKM盒带出几种转基因的猫狗品种，并测试这些基因的不同诱导方式，收集与小鼠相同的数据
研究方向2（“空中的巨蟹”）：寻找更安全的表观遗传回调因子（不会导致完全去分化）
- 通过测量表观遗传变化（使用Hannum / Horvath甲基化时钟）仅在体外研究Oct4因子开始-因为有证据表明 ，只有该转录因子才足以表观遗传复兴
- 理想情况下， 通过测量表观遗传变化（使用相同的Hannum / Horvath甲基化时钟） 在体外检查24个初始Yamanaki因子中的每一个
- 然后通过使用强力霉素盒为每种组合创建一个新的转基因株来检查快速衰老的LAKI小鼠中每种已鉴定因子的组合
- 通过每天持续激活来检查这些因素的安全性（例如Belmonte与OSKM的合作）。 目的是找到比OSKM因子更好的存活率（从诱导小鼠连续3天开始死亡）
- 此外，为了最安全的因素，请对LAKI小鼠测试新的给药方案，以将其寿命延长50％以上
- 平行项目：使用抗体代替因子Oct4，Sox2，c-Myc，如本工作中所示 。 如果这种方法行得通，那么根本就不需要基因操作 。 抗体的引入就足够了。 从LAKI小鼠开始，用肉眼检查WT小鼠的甲基化小时数变化（生物衰老的衰退不会比OSKM恶化吗？）
- 并行项目：如本文所述，研究Piwi和与Piwi相互作用的RNA作为转座子抑制剂和潜在表观遗传复兴的作用。
- 并行项目：研究组蛋白变体TH2A和TH2B，根据这项工作 ，它们可以替代Sox2和c-Myc，这意味着它们本身可以诱导表观遗传回弹。
研究方向3：运载工具（承运人）和可专利性
- 现在可以购买AAB和OSKM盒式慢病毒。 有必要将LAKI和WT成年小鼠用于（a）将这些基因传递给成年生物的效率，以及（b）诱导甲基化时间和生物学参数的影响的一系列实验。 即使OSKM基因远离所有细胞，此类小鼠的寿命也会更长吗？ 还需要订购此类研究。
- 对于整合（即通过将新基因整合到DNA中）方法，成年动物使用的主要障碍是整合程度低（AAV或慢病毒载体的10–50％）以及血脑屏障的低渗透性（我们很可能很关键振兴下丘脑很重要）。 因此，这应该是主要研究领域之一。 有必要测试顺序多次转染-是否有可能在所有组织中至少75％的细胞中实现必需基因的传递？ 我们需要一种防止在同一细胞中重复诱导的算法-如果有几个带有基因的盒进入其中，我们不希望它们全部被诱导。
- 其他递送方法： 蛋白质或mRNA 递送 （非整合性，但价格昂贵）。 向参与基因递送方法开发的公司订购研究。 例如， 圣甲虫基因组学 。
- 另一种方法： 抗体释放的DNA释放 （新的，实验的，昂贵的方法）。 有必要咨询其开发商。
- 为了最大程度地利用此疗法获得对Big Pharma感兴趣的机会-没有这种疗法就不可能进行价值数亿美元的临床试验-您不仅需要努力寻求安全有效的方法，而且还需要获得专利的方法：理想情况下，它应该是具有独特因素组合的盒式磁带，由安全，惰性和获得专利的激活剂激活（不同于强力霉素）。 只要有此类传送系统可用，弹药筒本身（外壳+感应器）就可以自行开发，也可以购买（许可）。
价格，日期
这是我得到的价格和条款：
- 研究方向1（小鼠中的OSKM因子）：$ 1.5–2百万； 任期：3年
- 研究方向1（宠物）：3-4百万美元； 任期：2年
- 研究方向2（最佳因素）：6–800万美元； 任期：4-5年
- 研究方向3（送货车）：2-3百万美元； 学期：2-3年
- 保安：3-5百万美元； 学期：2-3年
- 灵长类动物研究（可选）：2–250万美元； 任期：1-2年
- 薪金/管理费/专利/法律和其他：每年$ 1.5–2百万
关键项目里程碑：
- 用强力霉素诱导的OSKM基因启动转基因家畜的前2年
- 对成年宠物进行最低限度治疗前3-4年（带OSKM或其他因素的慢病毒）
- 在开始人类基本疗法的试验之前的5-6年（向FDA提交IND应用的阶段）
项目期限为5-6年，意味着在每年150-200万美元的基础上，间接费用为7.5-1200万美元。 因此，在IND阶段之前的总支出为：24-3,750万美元。
如果该项目成功进入IND阶段，Big Pharma公司将用胳膊和腿将其撕开，然后将开始进行此类治疗的临床试验（首先是动脉粥样硬化，阿尔茨海默氏病，糖尿病或其他年龄依赖性疾病，今天必须对其进行测试以减缓衰老，所以因为老龄化本身尚未被WHO归类为疾病）。
总结
莫斯科买家俱乐部的这一项目在我脑海中浮现。 甚至是“自救俱乐部”。 让我们看看会发生什么。 如果您能为他找到资金，我认为这将是一次光荣的狩猎。 我希望根据其结果，HIV 2.0将遭受重大损失，我们将能够为我们和我们所爱的人赢得至少几十年的健康生活。